BCA蛋白濃度測定試劑盒

規(guī)格:50ml/100ml，價格：125/235元，產(chǎn)品簡介

BCA蛋白濃度測定法是***的蛋白濃度檢測方法之一， BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。本試劑盒測定蛋白濃度靈敏度高，檢測濃度下限達到25µg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5µg，待測樣品體積為1-20µl。在50-2000µg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。而且不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。

試劑盒組份

組   份（50ml）（100ml） 存儲溫度

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 5μg/μL ） 5 mL 10 mL -20℃

BCA試劑A 50 mL 100 mL 4℃

BCA試劑B 1 mL 2 mL 4℃

試劑盒以外自備儀器和試劑

可調(diào)移液器、1.5m L離心管或96孔板、渦旋振蕩器、酶標(biāo)儀或分光光度計（測定波長為540-595nm之間，562nm最佳）。

操作步驟

A、普通分光光度計操作  1、 估計樣品蛋白的濃度范圍，并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。

管號 0 1 2 3 4 5 6 7 8（…樣品）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） 0 5 10 20 40 60 80 100 0

去離子水（μL） 100 95 90 80 60 40 20 0 100－X

樣品（μL） 0 0 0 0 0 0 0 0 X

BCA工作液（μL） 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000

對應(yīng)蛋白含量（μg） 0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 待測3、 取若干個帶蓋的1.5 mL離心管，編好號后，按下表加入試劑： 4、 各管充分混勻，37℃放置30分鐘，然后以0號管做參比在562nm下比色測定，記錄各管的吸光值。根據(jù)管號1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量（μg）， 除以加入樣品的體積（XμL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度。 B、酶標(biāo)板操作1、 估計樣品蛋白的濃度范圍，并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。3、 取一塊酶標(biāo)板，按照下表加入試劑：

孔號 0 1 2 3 4 5 6 7 8（…樣品）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20 0

去離子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0 20－X

樣品（μL） 0 0 0 0 0 0 0 0 X

BCA工作液（μL） 200 200 200 200 200 200 200 200 200

對應(yīng)蛋白含量（μg） 0 5 10 20 40 .0 80 100 待測 4、 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘再次振蕩，然后以0號孔在562nm下用酶標(biāo)儀進行比色測定。記錄各孔的吸光值。根據(jù)孔號1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量（μg）， 除以加入樣品的體積（XμL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度。

保存條件

蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液-20℃保存，BCA試劑A 和BCA試劑B 4℃保存，一年有效。

注意事項

1、 BCA試劑A 和BCA試劑B使用前請顛倒3-5次，混勻。2、 配制好的混合BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。3、 加入BCA工作液后，也可以在室溫放置2小時測定。BCA法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。實驗中可對作用溫度和作用時間進行優(yōu)化，如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。4、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液請在使用前先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。5、 比色應(yīng)在2h內(nèi)完成。6、 請穿實驗服并戴一次性手套操作。