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產(chǎn)品分類ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗是目前臨床上zui常用的免疫學(xué)檢驗方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀,既適宜于大規(guī)模篩查試驗,又可用于少量標(biāo)本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細胞因子檢測等領(lǐng)域。那么你知道影響ELISA結(jié)果的因素有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
一、樣品
樣品是檢測的前提,樣品質(zhì)量會直接影響實驗結(jié)果??梢杂肊LISA來檢測的樣品很多,根據(jù)檢測項目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等,但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣品,應(yīng)避免溶血,溶血可能會增加非特異性顯色,導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。
血清樣品的反復(fù)凍融會使血清中的抗體效價下降,所以需要多次檢測的血清樣品,如在5d內(nèi)檢測完,可4℃保存,如需長時間檢測,可進行分裝凍存。樣品如被細菌污染腐敗,可能會導(dǎo)致假陽性。
二、溫度
溫度主要影響抗原抗體反應(yīng),酶促反應(yīng)速度及非特異性吸附,溫度升高可使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)加速,但也易引起抗原抗體復(fù)合物的解離。酶促反應(yīng)速度同樣隨溫度升高而增快,但是酶蛋白變性也加快,喪失酶學(xué)活性,降低酶的有效濃度而減慢反應(yīng)速度,溫度低時以前者為主,高時以后者為主。
溫度是質(zhì)量控制的一個重要方面,一般允許±1℃的誤差。最好水浴,微孔板浮在水面,使溫度迅速平衡。如放溫箱內(nèi)溫育,微孔板不應(yīng)疊置,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,盛放微孔板的濕盒應(yīng)是金屬的,傳熱容易??諠窈袘?yīng)預(yù)先放在溫箱中,以平衡溫度,在室溫較低時更需要。
三、時間
在溫度保證的前提下,時間的控制至關(guān)重要,尤其是底物顯色的時間控制,顯色時間不足或過長會導(dǎo)致實驗不成立,無法對檢測結(jié)果進行判斷。
加人標(biāo)本、試劑及混合的時間稱為操作時差。操作時差在每個試驗中都存在,對結(jié)果或多或少有影響。對手工操作,尤其是樣品量大的項目,從加人第一個標(biāo)本到最后一個標(biāo)本,需幾十分鐘,加人試劑及混勻存在很大的時間差異,使抗原抗體和酶促反應(yīng)時間不一致,易產(chǎn)生假陽性、假陰性結(jié)果。
因此,樣品過多時,請選擇分批操作,對勿須更換移液口吸嘴的酶結(jié)合物,底物的加樣可選擇8聯(lián)或12聯(lián)專用的多道加液器。亦可避免單孔滴加底物時遺漏多加。
四、試劑
試劑盒要根據(jù)要求進行保存,并保證在有效期內(nèi)使用,使用前應(yīng)平衡到室溫。新購入的試劑盒要進行校驗,檢查實驗是否成立,不同的試劑盒或不同批號的試劑不可混用。
五、其他
封板膜封閉不嚴(yán)或開啟時孔內(nèi)液體蒸發(fā)、震出可導(dǎo)致各孔相互污染;操作時接觸到ELISA板底導(dǎo)致透光度改變,影響酶標(biāo)儀測量結(jié)果;
加樣圖省事,未認(rèn)真更換移液器吸頭,認(rèn)為其帶入標(biāo)本殘留量小,不易影響結(jié)果,是部分檢測人員常有的心理。因此加標(biāo)本時必須認(rèn)真更換移移液器吸頭,防止移液器吸頭殘留痕量產(chǎn)生假陽性結(jié)果。加樣時應(yīng)防止濺出污染其它標(biāo)本。
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